Ascaris IgM ELISA KitREF 5016 | Tài liệu Tiếng anh

96 Tests In vitro diagnostic Ascaris IgM ELISA Kit medical device REF 5016 INTENDED USE Th e
Ascaris ELISA test is a semi-quantitative enzyme immunoassay for the detection of IgM antibodies to Ascaris, in samples of human
serum or plasma. Th is test is intended to be performed by trained medical technologists only. SUMMARY OF EXPLANATION
Ascaris lumbricoides has probably been infecting humans for thousands of years.1 It is the most common nematode parasite infecting
humans and over 1 billion people are believed to be infected.3 Children who live in moist, warm climates are the most at risk to
become infected.1,3 Ingesting embryonated eggs from contaminated soil is the primary means of infection.1 Th e eggs will hatch in
either the stomach or small intestine where the larvae penetrate through the intestine wall.1-3 Larvae are carried to the heart and then
to the lungs, where they stay for approximately 10 days. Larvae will then go into the alveoli and migrate via the bronchi to the trachea
and pharynx. Th e larvae are coughed up, swallowed, and returned to the intestine where they mature and mate, eventually producing
eggs.1,3 Th is process occurs over 8 – 12 weeks. Eggs will get passed into the environment via feces. Fertilized eggs will become infective
within 2 weeks if they are kept in warm, moist soil. Adult worms usually live for about 1 year. Females are 20 – 35 cm long and can
produce 200,000 eggs per day where as males are 15– 31 cm long and have a curved posterior end.1-3 Pathogenisis in humans from
Ascaris can be cause by the host’s immune response, eff ects of larvae migration, mechanical eff ects of adult worms, and also nutritional
defi ciencies caused by the adult worms being present in the body. Th ere are usually no symptoms involved with the initial passage of
larvae through the liver and lungs unless the number of worms is high. Bronchial epithelium damage may result from larvae exiting
lung tissue.1 When successive migrations of larvae occur, more intense tissue reactions may be observed. Th is could be accompanied
by a dry or productive cough, fever, transient eosinophilia, dyspnea, and a chest x-ray that resembles viral pneumonia; this condition
being referred to as Ascaris pneumonitis. Th e presence of adult worms in the intestine usually shows no symptoms unless the number
of worms present is high. However, even a single worm can cause damage due to the worms tendency to migrate.1,2 Certain stimuli
may result in migration such as fever, general anesthesia, as well as other abnormal body conditions. Th is can result in entry into the
bile duct, liver or other small spaces as well as intestinal blockage.1 Worms have been known to spontaneously migrate out of the body
through the mouth, nose or anus.1,2 Eighty-fi ve percent of humans infected with Ascaris will exhibit no symptoms.3 Th e primary means
of preventing the spread of Ascaris infection is through the use of appropriate sanitation facilities and practices, such as frequent
washing of the hands. Th e use of human feces, known as night soil, as fertilizer should be recognized as potentially hazardous.1,3 Any
fruits or vegetables that are grown using night soil cannot be eaten raw. Even aft er fi elds using night soil have been processed and
treated, Ascaris eggs may still remain viable and infective.1 PRINCIPLE OF PROCEDURE
Th e microwel s are coated with Ascaris antigen. During the fi rst incubation with the diluted patients’ sera, any antibodies which are
reactive with the antigen will bind to the coated wel s. Aft er washing to remove the rest of the sample, the Enzyme Conjugate is added.
If antibodies have been bound to the wel s, the Enzyme Conjugate will then bind to these antibodies. Aft er another series of washes, a
chromogen (tetramethylbenzidine or TMB) is added. If the Enzyme Conjugate is present, the peroxidase will catalyze a reaction that
consumes the peroxide and turns the chromogen from clear to blue. Addition of the Stop Solution ends the reaction and turns the blue
color to a bright yellow color. Th e reaction may then be read visual y or with an ELISA reader. MATERIALS PROVIDED Ascaris IgM ELISA Kit
Test Strips Microwells containing Ascaris antigens – 96 test wells in a test strip holder. Foil pouch. Ready to use.
Enzyme Conjugate One (1) bottle containing 13 ml of anti-human IgM (mu chain) conjugated to peroxidase. Blue cap. Blu solution. Ready to use.
Positive Control One (1) vial containing 2 ml of diluted surrogate positive control. Red cap. Clear solution. Ready to use.
Negative Control One (1) vial containing 2 ml of diluted negative human serum. Blue cap. Clear solution. Ready to use.
Chromogen One (1) bottle containing 13 ml of chromogen tetramethylbenzidine (TMB). Amber cap. Clear solution. Ready to use.
Wash Concentrate (20X) Two (2) bottles containing 25 ml of concentrated buff er and surfactant. White cap. Clear solution. Ready to Ascaris IgM Rev. 2025-06-04 Made in the USA 1 REF 5016 use.
Dilution Buff er Two (2) bottles containing 30 ml of buff ered protein solution. Clear cap. Clear solution. Ready to use.
Stop Solution One (1) bottle containing 13 ml of 1 M phosphoric acid. Clear cap. Clear solution. Ready to use.
MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED - Micropipette - Reagent grade (DI) water - Graduated Cylinder - Timer - Tubes for serum dilution - Absorbent paper SUGGESTED MATERIALS
ELISA plate reader with a 450 nm and a 620 - 650 nm fi lter PROPER TEMPERATURE
All incubations are at room temperature (15-25°C) PRECAUTIONS
Do not deviate from the specifi ed procedures when performing this assay. All specimen dilutions, incubation times/temperatures and
washings have been optimized for the best performance characteristics.
Deviations from the specifi ed procedures may aff ect the sensitivity and specifi city of the assay.
For In Vitro Diagnostic Use Only.
Do not interchange reagents between kits with diff erent lot numbers.
Do not use reagents that are beyond their expiration dates.
Expiration dates are on each reagent label. Use of reagents beyond their expiration dates may aff ect results.
Unused microwel s should be stored in the desiccated pouch to protect them from moisture.
Do not use solutions if they precipitate or become cloudy.
Exception: Wash concentrate may precipitate during refrigerated storage but will dissolve upon warming.
Do not add azides to the samples or any of the reagents.
Controls and some reagents contain Th imerosal as a preservative, which may be irritating to skin, eyes and mucous membranes. In case
of contact, fl ush eyes or rinse skin with copious amounts of water.
Do not use serum that may have supported microbial growth or is cloudy due to high lipid content. Samples high in lipids should be clarifi ed before use.
Treat all reagents and samples as potential y infectious materials. Negative control has been tested and found negative for Hepatitis B
surface antigen and for the antibody to HIV be required test methods. Use care to prevent aerosols and decontaminate any spil s of samples.
Stop solution is a 5% solution of phosphoric acid in water. If spilled on the skin, wash with copious amounts of water. If acid gets into
the eyes, wash with copious amounts of water and seek medical attention. STORAGE CONDITIONS
Reagents, strips and bottled components should be stored at 2-8 °C
Squeeze bottle containing diluted wash buff er may be stored at room temperature (15-25 °C). PREPARATION
Before use, bring all reagents and samples to room temperature (15-25 °C) and mix.
(20X) Wash Concentrate may precipitate during refrigerated storage but will go back into solution when brought to room temperature
and mixed. Ensure that (20X) Wash Concentrate is completely in solution before diluting to working concentration. To dilute (20X)
wash concentrate to working dilution, remove cap and add contents of one bottle of Wash Concentrate to a squeeze bottle containing
475 ml of DI water. Swirl to mix. Squeeze bottle should have a narrow tip to optimize washings. Ascaris IgM Made in the USA Rev. 2025-06-04 2 REF 5016
COLLECTION AND PREPARATION OF SAMPLE
Serum or plasma may be stored at 2-8 ºC for up to fi ve days. Sample may be frozen below
-20 ºC for extended periods. Freezing whole blood samples is not advised. Do not heat inactivate samples and avoid repeated freezing and thawing of samples. Sample Preparation
Dilute patient sample 1:100 using the Dilution Buff er (e.g. 5 µl sample and 500 µl dilution buff er). ASSAY PROCEDURE Notes:
Ensure all samples and reagents are at room temperature (15-25°C)
Negative and positive controls are supplied pre-diluted. DO NOT dilute further. 1.
Break off number of wells needed (three for controls plus number of samples) and place in strip holder. 2.
Add 100 µl of the negative control to well #1 and well #2, 100 µl of the positive control to well #3 and 100 µl of
the diluted test samples to the remaining wells. 3.
Incubate at room temperature for 30 minutes, then wash.* 4.
Shake out contents and wash 3 times with the diluted wash buffer. 5.
Add 100 µl of Enzyme Conjugate to each well. 6.
Incubate at room temperature for 10 minutes, then wash.* 7.
Add 100 µl of the Chromogen to each well. 8.
Incubate at room temperature for 10 minutes. 9.
Add 100 µl of the Stop Solution to each well. Mix contents by gently tapping the side of the strip holder. 10.
Read within one hour of adding Stop Solution.
* Washings consist of 5 washings of 300 µl per well for each step with a 30 second dwell time for each wash set. If possible, slap out
excessive wash buff er from the wells against absorbent toweling before addition of the next reagent. Proper and thorough washing
is key to obtaining accurate and reproducible results. READING OF RESULTS
Visual y: Look at each well against a white background (e.g. paper towel) and record as clear or +, ++ or +++ reaction.
ELISA Reader: Zero reader on air. Set for bichromatic readings at 450/650-620 nm.
INTERPRETATION OF THE TEST – ELISA READER
1 – Calculate the average extinction value by taking the average OD value of the Negative Control.
2 – Add 0.300 to this average extinction value. Th i s value is the cut-off va lue used in the Sample Index Calculation. Example: Negative Control 1 OD = 0.084 Negative Control 2 OD = 0.100
Average is 0.084 + 0.100 = 0.184 / 2 =
0.092 = Average Extinction Value
Cut-off va lue is the Average Extinction Value + 0.300 (in this example 0.092 + 0.300 = 0.392 Ascaris IgM Made in the USA Rev. 2025-06-04 3 REF 5016
3 – Determine the Sample Index by dividing the patients OD value by the Cut-off value. Example:
Patient OD value of 1.225 Cut-off value of 0.392 1.225 / 0.392 = 3.12
4 – Evaluate the Sample Index.
Negative = less than 1.0 Sample Index
Equivocal = 1.0 to 1.5 Positive = greater than 1.5 QUALITY CONTROL
Th e use of controls allows validation of kit stability. Th e kit should not be used if any of the controls are out of range.
Expected values for the controls are: Negative - 0.0 to 0.2 OD units
Positive - 0.5 OD units and above TROUBLESHOOTING
Negative control has excessive color aft er development. Reason: inadequate washings
Correction: wash more vigorously. Remove excessive liquid from the wells by tapping against an Absorbent towel. Do not allow test wells to dry out. TEST LIMITATIONS
Diagnosis of Ascaris infection should not be made solely based on results of the ELISA Ascaris test alone, but in conjunction with other
clinical signs and symptoms and other laboratory fi ndings.
Epidemiologic factors, clinical fi ndings, exposure to endemic regions, and other laboratory results should be considered when making a diagnosis. REFERENCES 1.
Bruckner, D., Garcia, L. Diagnostic Medical Parasitology. 2nd Edition. American Society for Microbiology, 1993. pp. 184-192. 2.
Murray, P. et al. Manual of Clinical Microbiology. 7th Edition. American Society for Microbiology, 1999. p. 1424. 3. Bogitsh, B., Cheng, T.
Human Parasitology. Saunders College Publishing, 1990. pp. 321-325 Manufacturer New Life Diagnostics, Inc. 5909 Sea Lion Pl, Suite A Carlsbad, CA 92010 USA info@newlifediagnostics.com www.newlifediagnostics.com Ascaris IgM Made in the USA Rev. 2025-06-04 4 REF 5016 Ascaris IgM ELISA Kit Mã 5016
MỤC ĐÍCH SỬ DỤNG
Ascaris ELISA dùng để xác định bán định lượng kháng thể IgM kháng Ascaris (giun đũa) bằng phương pháp Hấp thụ miễn dịch
liên kết enzyme (ELISA), trong mẫu huyết thanh hoặc huyết tương người. Xét nghiệm này chỉ được thực hiện bởi các kỹ thuật
viên y tế đã qua đào tạo.
TÓM TẮT VÀ GIẢI THÍCH
Ascaris lumbricoides có lẽ đã gây nhiễm ở người từ hàng ngàn năm trước. Đây là loài giun tròn ký sinh phổ biến nhất ở người, với
hơn 1 tỷ người được cho là đang bị nhiễm. Trẻ em sống ở những vùng khí hậu ẩm và ấm là đối tượng có nguy cơ cao nhất bị nhiễm.
Hình thức lây nhiễm chính là nuốt phải trứng đã phát triển (trứng có phôi) có trong đất bị ô nhiễm. Trứng sẽ nở trong dạ dày hoặc
ruột non, nơi ấu trùng xuyên qua thành ruột. Ấu trùng được đưa đến tim và sau đó đến phổi, nơi chúng lưu lại khoảng 10 ngày. Sau
đó, ấu trùng di chuyển vào phế nang, qua phế quản đến khí quản và hầu họng. Tại đây, chúng được ho lên, nuốt lại và trở về ruột
để trưởng thành và giao phối, cuối cùng sinh sản ra trứng. Toàn bộ quá trình này diễn ra trong khoảng 8–12 tuần. Trứng được thải
ra môi trường qua phân. Nếu ở trong đất ấm và ẩm, trứng thụ tinh có thể trở nên có khả năng gây nhiễm sau khoảng 2 tuần. Giun
trưởng thành thường sống được khoảng 1 năm. Con cái dài 20–35 cm, có thể đẻ đến 200.000 trứng mỗi ngày, trong khi con đực
dài 15–31 cm và có đuôi cong.
Tác hại của Ascaris đối với con người có thể do phản ứng miễn dịch của cơ thể, do ấu trùng di chuyển gây tổn thương, do tác động
cơ học của giun trưởng thành hoặc do thiếu hụt dinh dưỡng khi giun sống trong cơ thể. Thông thường, giai đoạn ấu trùng đi qua
gan và phổi không gây triệu chứng, trừ khi số lượng giun lớn. Tổn thương biểu mô phế quản có thể xảy ra khi ấu trùng chui ra khỏi
mô phổi. Khi có sự di chuyển lặp lại của ấu trùng, phản ứng mô có thể trở nên nghiêm trọng hơn, kèm theo ho khan hoặc ho có
đờm, sốt, tăng bạch cầu ái toan tạm thời, khó thở và hình ảnh X-quang phổi giống viêm phổi do virus – tình trạng này được gọi là
viêm phổi do Ascaris (Ascaris pneumonitis).
Sự hiện diện của giun trưởng thành trong ruột thường không gây triệu chứng, trừ khi số lượng lớn. Tuy nhiên, ngay cả một con
giun cũng có thể gây hại do đặc tính di chuyển của chúng. Một số yếu tố kích thích như sốt, gây mê toàn thân hoặc các rối loạn
trong cơ thể có thể khiến giun di chuyển đến ống mật, gan hoặc các không gian nhỏ khác, thậm chí gây tắc ruột. Đã có những
trường hợp giun tự động chui ra khỏi cơ thể qua miệng, mũi hoặc hậu môn. Khoảng 85% người nhiễm Ascaris không có triệu chứng rõ ràng.
Biện pháp phòng ngừa chính để hạn chế lây lan nhiễm Ascaris là sử dụng nhà vệ sinh hợp vệ sinh và thực hành vệ sinh cá nhân
đúng cách, chẳng hạn như rửa tay thường xuyên. Việc sử dụng phân người (còn gọi là "phân đêm") làm phân bón cần được xem là
nguy hiểm tiềm tàng. Mọi loại rau quả trồng bằng phân đêm không được ăn sống. Ngay cả khi đất trồng đã được xử lý sau khi dùng
phân đêm, trứng Ascaris vẫn có thể còn sống và có khả năng gây nhiễm.
NGUYÊN TẮC XÉT NGHIỆM
Các vi giếng được phủ một lớp kháng nguyên Ascaris. Trong thời gian ủ bệnh đầu tiên với huyết thanh của bệnh nhân đã được pha
loãng, bất kỳ kháng thể nào phản ứng với kháng nguyên sẽ liên kết với các giếng được phủ. Sau khi rửa để loại bỏ phần còn lại của
mẫu, kháng nguyên liên hợp được thêm vào. Nếu các kháng thể đã được liên kết với các giếng, kháng nguyên sau đó sẽ liên kết với
các kháng thể này. Sau nhiều lần rửa khác, một chất màu (tetramethylbenzidine hoặc TMB) được thêm vào. Nếu kháng nguyên liên
hợp có mặt, peroxidase sẽ xúc tác một phản ứng tiêu thụ peroxide và chuyển màu từ trong sang xanh lam. Thêm dung dịch dừng
kết thúc phản ứng chuyển từ màu xanh lam sang màu vàng tươi. Phản ứng sau đó có thể được đọc bằng mắt hoặc bằng đầu đọc ELISA.
NGUYÊN LIỆU ĐƯỢC CUNG CẤP
Bộ dụng cụ ELISA xét nghiệm huyết thanh Ascaris IgM
Dãy giếng Vi giếng chứa kháng nguyên Ascaris– 96 giếng thử trong một khung giữ. Túi nhôm. Sẵn sàng sử dụng.
Enzyme liên hợp Một (1) lọ chứa 13 ml kháng thể kháng IgM (chuỗi mu) của người, liên hợp với peroxidase. Nắp đỏ. Dung
dịch đỏ. Sẵn sàng sử dụng.
Chứng dương Một (1) lọ chứa 2 ml chất chứng dương đại diện. Nắp đỏ. Dung dịch trong suốt. Sẵn sàng sử dụng.
Chứng âm Một (1) lọ chứa 2 ml huyết thanh người âm tính đã được pha loãng. Nắp xanh. Dung dịch trong suốt. Sẵn sàng sử dụng.
Cơ chất/Chất sinh màu Một (1) chai chứa 13 ml cơ chất Tetramethylbenzidine (TMB). Nắp hổ phách. Dung dịch trong suốt. Sẵn sàng sử dụng. Ascaris IgM ELISA Kit Sản xuất ở Mỹ Rev. 2025-04-02 REF 5016 1
Dung dịch rửa đậm đặc (20X) Hai (2) chai chứa 25 ml dung dịch đệm đậm đặc và chất hoạt động bề mặt. Nắp trắng. Dung dịch
trong suốt. Sẵn sàng sử dụng.
Đệm pha loãng Hai (2) chai chứa 30 ml dung dịch protein đệm. Nắp trong. Dung dịch trong suốt. Sẵn sàng sử dụng.
Dung dịch dừng Một (1) chai chứa 13ml acid Phosphoric 1M. Nắp trong. Dung dịch trong suốt. Sẵn sàng sử dụng.
VẬT LIỆU CẦN NHƯNG KHÔNG ĐƯỢC CUNG CẤP -Pipettes
-Bình bóp để rửa dải giếng (nên dùng đầu hẹp) -Nước và ống đong -Ống pha loãng mẫu -Giấy thấm
VẬT LIỆU ĐƯỢC ĐỀ NGHỊ
Máy đọc ELISA với bộ lọc 450nm và bộ lọc 620 – 650nm (tuỳ chọn nếu kết quả được đọc trực quan)
NHIỆT ĐỘ THÍCH HỢP
Tất cả các bước ủ đều được thực hiện ở nhiệt độ phòng (15–25°C). CẨN TRỌNG
Không được thay đổi quy trình đã quy định khi thực hiện xét nghiệm này. Tất cả các bước pha loãng mẫu, thời gian/nhiệt độ ủ và
bước rửa đã được tối ưu hóa để đạt hiệu suất tốt nhất.
Việc thay đổi các quy trình này có thể ảnh hưởng đến độ nhạy và độ đặc hiệu của xét nghiệm.
Chỉ sử dụng cho chẩn đoán trong ống nghiệm (In Vitro Diagnostic Use Only).
Không được hoán đổi thuốc thử giữa các bộ kit có số lô khác nhau.
Không sử dụng thuốc thử đã quá hạn sử dụng.
Ngày hết hạn được ghi trên nhãn của từng loại thuốc thử. Việc sử dụng thuốc thử quá hạn có thể làm sai lệch kết quả.
Các giếng vi thể chưa sử dụng phải được bảo quản trong túi có chất hút ẩm để tránh ẩm.
Không sử dụng các dung dịch nếu chúng bị kết tủa hoặc vẩn đục.
Ngoại lệ: Dung dịch rửa cô đặc có thể kết tủa khi bảo quản lạnh, nhưng sẽ tan lại khi làm ấm.
Không thêm natri azide vào mẫu hoặc bất kỳ thuốc thử nào.
Các mẫu chứng và một số thuốc thử có chứa thimerosal như một chất bảo quản, có thể gây kích ứng da, mắt và niêm mạc. Nếu tiếp
xúc, hãy rửa mắt hoặc vùng da bị dính bằng nhiều nước.
Không sử dụng huyết thanh có dấu hiệu nhiễm vi sinh hoặc bị đục do hàm lượng lipid cao. Các mẫu có nồng độ lipid cao cần được
làm trong trước khi sử dụng.
Xử lý tất cả thuốc thử và mẫu như vật liệu có khả năng lây nhiễm. Mẫu chứng âm đã được kiểm tra và xác nhận âm tính với kháng
nguyên bề mặt viêm gan B (HBsAg) và kháng thể HIV bằng các phương pháp kiểm tra yêu cầu.
Cần cẩn trọng để tránh tạo khí dung và khử nhiễm ngay các vết đổ của mẫu.
Dung dịch dừng phản ứng là dung dịch 5% axit phosphoric trong nước. Nếu bị đổ lên da, rửa với nhiều nước. Nếu axit bắn vào mắt,
cần rửa ngay bằng nước và tìm kiếm hỗ trợ y tế.
ĐIỀU KIỆN BẢO QUẢN
Thuốc thử, dãy giếng và thành phần được đóng chai nên được bảo quản tại 2-8 °C
Bình bóp chứa dung dịch đệm rửa được pha loãng nên được bảo quản tại nhiệt độ phòng. CHUẨN BỊ
Dung dịch rửa cô đặc (20X) có thể bị kết tủa trong quá trình bảo quản lạnh, nhưng sẽ tan trở lại khi được đưa về nhiệt độ phòng
và trộn đều. Hãy đảm bảo rằng dung dịch rửa cô đặc (20X) đã hoàn toàn tan trước khi pha loãng đến nồng độ sử dụng. Để pha
loãng dung dịch rửa cô đặc (20X) đến nồng độ làm việc, hãy mở nắp và đổ toàn bộ dung dịch trong một chai dung dịch rửa cô đặc
vào một bình bóp có chứa 475 ml nước cất khử ion (DI water). Lắc đều để trộn. Bình bóp nên có đầu nhỏ để tối ưu hóa quá trình rửa. THU VÀ XỬ LÝ MẪU
Huyết thanh hoặc huyết tương có thể được bảo quản ở nhiệt độ 2–8 oC trong tối đa năm ngày. Để máu đông lại rồi tách huyết
thanh. Nếu không sử dụng ngay, cần đông lạnh mẫu ở -20 oC hoặc thấp hơn.
Không làm nóng bất hoạt huyết thanh và tránh đông lạnh và rã đông mẫu nhiều lần. Chuẩn bị mẫu
Mẫu thử: Pha loãng huyết thanh theo tỷ lệ 1:100 bằng dung dịch đệm pha loãng (ví dụ: 5 µl huyết thanh và 500 µl dung dịch đệm). Ascaris IgM ELISA Kit Sản xuất ở Mỹ Rev. 2025-04-02 REF 5016 2
QUY TRÌNH XÉT NGHIỆM Ghi chú:
Đảm bảo tất cả mẫu thử và thuốc thử đều ở nhiệt độ phòng (15–25°C).
Mẫu chứng âm và chứng dương đã được pha loãng sẵn. KHÔNG được pha loãng thêm. 1.
Bẻ số lượng giếng cần dùng (ba giếng đối chứng cộng với số lượng mẫu) và đặt vào khay 2.
Thêm 100 µl chứng âm vào giếng #1 và #2, 100 µl chứng dương vào giếng #3 và 100 µl mẫu đã được pha loãng
vào các giếng còn lại. Ghi chú: Chứng âm và chứng dương đã được pha loãng. Không pha loãng thêm 3.
Ủ ở nhiệt độ phòng (15-25°C) trong 30 phút. 4.
Loại bỏ các chất và rửa 3 lần với đệm rửa pha loãng. Vỗ giếng vào khăn giấy để loại bỏ dung dịch đệm rửa. 5.
Thêm 100 µl Enzyme liên hợp vào mỗi giếng 6.
Ủ ở nhiệt độ phòng trong 10 phút 7.
Loại bỏ các chất và rửa 3 lần với đệm rửa pha loãng. Vỗ giếng vào khăn giấy để loại bỏ dung dịch đệm rửa. 8.
Thêm 100 µl cơ chất vào mỗi giếng 9.
Ủ ở nhiệt độ phòng trong 10 phút 10.
Thêm 100 µl dung dịch dừng và trộn bằng cách gõ vào khung giữ 11.
Đọc kết quả trong vòng một giờ sau khi thêm dung dịch dừng phản ứng.
* Bước rửa bao gồm việc làm đầy tràn mỗi giếng và hút bỏ thành phần với 3 lần riêng biệt. Nếu sử dụng máy rửa tự
động, thêm 1 phút ngâm giữa các lần rửa và tăng số lần rửa từ ba lên năm. ĐỌC KẾT QUẢ
Trực quan: nhìn vào mỗi giếng trên nền trắng (vd: khăn giấy) và ghi lại rõ ràng +, ++ hoặc +++.
Máy đọc ELISA: đọc OD không khí bằng máy. Thiết lập đọc ở 450/620-650 nm.
DIỄN GIẢI KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM – MÁY ĐỌC ELISA
1 – Tính giá trị hấp thụ trung bình bằng cách lấy giá trị OD trung bình của mẫu chứng âm.
2 – Thêm 0,300 vào giá trị hấp thụ trung bình. Giá trị này là khoảng cut-off được sử dụng để tính toán Chỉ số mẫu (Sample Index). Ví dụ: Negative Control 1 OD = 0,084 Negative Control 2 OD = 0,100
Trung bình 0,084 + 0,100 = 0,184 / 2 = 0,092 = Giá trị hấp thụ trung bình
Giá trị Cut-off là Giá trị hấp thụ trung bình + 0,300 (trong ví dụ này 0,092 + 0,300 = 0,392)
3 – Xác định Chỉ số mẫu của bệnh nhân bằng cách chia OD bệnh nhân với giá trị Cut- off. Ví dụ:
Giá trị OD bệnh nhân: 1,225 Giá trị Cut-off: 0,392
Chỉ số mẫu: 1,225 / 0,392 = 3,12
4 – Đánh giá Chỉ số mẫu (Sample Index).
Âm tính = thấp hơn 1,0 Chỉ số mẫu Nghi ngờ = 1,0 đến 1,5 Dương tính = lớn hơn 1,5
KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG
Việc sử dụng các chứng nhằm đánh giá sự ổn định của kit. Kit không nên sử dụng nếu các chứng nằm ngoài
phạm vi. Giá trị dự kiến cho các chứng: Chứng âm - 0,0 to 0,2 đơn vị OD Chứng dương-
0,5 OD giá trị OD trở lên Ascaris IgM ELISA Kit Sản xuất ở Mỹ Rev. 2025-04-02 REF 5016 3 XỬ LÝ SỰ CỐ
Chứng âm có màu sắc đậm.
Nguyên nhân: rửa không đủ.
Biện pháp: rửa mạnh hơn. Loại bỏ hoàn toàn chất lỏng từ các giếng bằng cách đập nhẹ vào một chiếc khăn thấm nước. Không cho giếng thử khô.
GIỚI HẠN XÉT NGHIỆM
Kết quả huyết thanh học là một công cụ hỗ trợ chẩn đoán nhưng không thể được sử dụng làm phương pháp chẩn đoán duy nhất.
Việc chẩn đoán nhiễm bệnh không nên chỉ dựa vào kết quả của xét nghiệm ELISA, mà cần được kết hợp với các dấu hiệu lâm sàng,
triệu chứng và các kết quả xét nghiệm khác.
Khi đưa ra chẩn đoán, cần xem xét các yếu tố dịch tễ, biểu hiện lâm sàng, khả năng phơi nhiễm tại vùng lưu hành dịch, cùng với các
kết quả xét nghiệm bổ sung khác. TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Bruckner, D., Garcia, L. Diagnostic Medical Parasitology. 2nd Edition. American Society for Microbiology, 1993. pp. 184-192.
2. Murray, P. et al. Manual of Clinical Microbiology. 7th Edition. American Society for Microbiology, 1999. p. 1424.
3. Bogitsh, B., Cheng, T. Human Parasitology. Saunders Col ege Publishing, 1990. pp. 321-325 Manufacturer New Life Diagnostics, Inc. 5909Sea Lion Pl,SuiteA Carlsbad, CA92010 USA info@newlifediagnostics.com www.newlifediagnostics.com Ascaris IgM ELISA Kit Sản xuất ở Mỹ Rev. 2025-04-02 REF 5016 4
Document Outline

• 1. Bẻ số lượng giếng cần dùng (ba giếng
• 2. Thêm 100 µl chứng âm vào giếng #1 và
• 3. Ủ ở nhiệt độ phòng (15-25°C) trong
• 4. Loại bỏ các chất và rửa 3 lần với đ
• 5. Thêm 100 µl Enzyme liên hợp vào mỗi
• 6. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 10 phút
• 7. Loại bỏ các chất và rửa 3 lần với đ
• 8. Thêm 100 µl cơ chất vào mỗi giếng
• 9. Ủ ở nhiệt độ phòng trong 10 phút
• 10. Thêm 100 µl dung dịch dừng và trộn b
• 11. Đọc kết quả trong vòng một giờ sau k