Họ và tên : Lê Tấn Thịnh MSSV : 2253030091 Nhóm : B1 ; Tiểu nhóm 01.
Bài phúc trình số 5:
Sắc ký cột và sắc ký bản mỏng 1. SẮC KÝ CỘT 1.1.
Cách tiến hành và hiện tượng quan sát được 1.1.1.
Chuẩn bị cột sắc ký
Sử dụng cọng kẽm nhồi một lớp bông gòn khoảng 1-2 mm vào đáy cột (không nhồi cứng). Lắp cột sắc ký vào giá.
Cho 15ml dung môi eter dầu hỏa vào becher 100ml, thêm từ từ 5g silica gel vào và khuấy đều.
Cho silica gel vào cột sắc ký, mở khóa cho dung môi chảy (không nên gõ đều cột). Lưu ý luôn
để dung môi ngập trên silica gel. Sau khi cho hết silica gel, vẫn mở khóa để dung môi chảy từng giọt
cho đến khi lớp dung môi nằm trên silica gel khoảng 1mm thì khóa cột lại. 1.1.2.
Trích ly sắc tố lá cây
Cho 5g lá cây đã rửa sạch, lau thật khô, cắt nhỏ vào cối rồi dùng chày nghiền nát.
Chuyển lá cây đã nghiền nát vào erlen 250ml có chứa sẵn 50ml hỗn hợp eter dầu hỏa: aceton
với tỷ lệ 3:2, lắc đều trong 10 phút, lọc lấy dịch trích và cho vào becher 100ml.
Cho dịch trích vào bình lóng, rửa bằng (20ml x 2 lần) nước cất, chuyển dịch trích vào erlen
50ml, làm khan bằng Na2SO4 khan, lọc.
Đun cách thủy dịch trích đã làm khan để loại bớt dung môi, thu được một dung dịch sắc tố
đậm đặc (khoảng 2ml). Dịch sắc tố này được đun để sắc ký bản mỏng và nạp vào cột sắc ký. 1.1.3.
Nạp sắc tố vào cột sắc ký
Cho một ít mẫu sắc tố vào lọ đựng riêng để làm sắc ký bản mỏng, dùng ống nhỏ giọt để đưa
mẫu sắc tố vào đầu cột sắc ký, dùng eter dầu hỏa rửa thành cột và ống mao quản. Sau khi nạo xong,
để yên 2 phút cho mẫu được cân bằng với chất hấp phụ (silica gel) và dung môi giải ly (eter dầu hỏa). 1.1.4. Giải ly cột
Mở khóa cho dung môi chảy đến khi hh dung dịch sắc tố bằng với lớp chất hấp phụ thì nhẹ
nhàng thêm dung môi eter dầu hỏa vào đầu cột (thêm thật nhẹ nhàng), mở khóa và hứng phần dung môi chảy ra khỏi cột.
Liên tục cho dung môi eter dầu hỏa vào, sắc tố β-caroten màu vàng sẽ di chuyển nhanh ra
khỏi cột trước tiên, hứng lấy phần sắc tố đó.
Sau khi sắc tố màu vàng ra khỏi cột, thay dung môi eter dầu hỏa bằng hệ dung môi eter dầu
hỏa: etyl acetat (7:3). Lúc này sắc tố chlorophyl màu xanh lục sẽ bắt đầu di chuyển xuống dưới, hứng lấy phần sắc tố đó. 1.2. Trả lời câu hỏi 1.2.1.
Tại sao hỗn hợp mẫu chất sau khi nạp lên đầu cột cần được giải ly ngay, tránh
ngưng quá trình giải ly một thời gian?
Vì nếu ngưng thì trật tự sắp xếp của các chất trong hỗn hợp sẽ bị xáo trộn làm cho sự tách
không còn hiệu quả nữa. 1.2.2.
Tại sao phải làm khan dịch trích trước khi nạp lên cột sắc ký?
Vì trong quá trình chuẩn bị ta sử dụng rất nhiều dung môi hửu cơ nên cần làm khan để loại bớt
dung môi và đồng thời để thu được một sắc tô đậm đặc. 1.2.3.
Trình bày công thức cấu tạo của β - caroten và clorophyl  β - caroten  Chlorophyl 1.2.4.
Dự đoán thứ tự ra khỏi cột của ba chất A, B, C
(A) 2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5-hydroxy- 3,7-dimethoxy-4H-chromen-4-one
(B) (3aS,9S,10aS)-3,9-dimethylldecahydro-2H-
6a,9-epidioxyxepino[4,3,2-ij]isochromen-2-one
(C) (2S,3S,4R,5R,6R)-2-((1,3-dihydroxypropan-2-
yl)oxy)-6-ethoxytetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol
Vì bản chất hóa học của bề mặt silica gel là những nhóm silanol-OH nên những chất phân cực
hơn sẽ bị silica gel giữ chặt lại và giải ly muộn hơn so với những chất khác vì có khả năng tạo liên kết hydrogen mạnh.
 Thứ tự ra khỏi cột là: B -> A -> C. 2. SẮC KÝ BẢN MỎNG 2.1. Cách tiến hành 2.1.1.
Chuẩn bị bảng mỏng
Dùng bút chì đánh dấu trên mép vạch (vạch tiền tuyến) 0,5cm, dưới (vạch xuất phát) 1cm để
định mức hẹ dung ly thấm ước
Dùng ống vi quản lần lượt chấm từng dung dịch lên tấm dưới tấm bảng mỏng thành 3 chấm: vết
bên trái là vanil in (chấm 2 lần), vết ở giữa là β-naphtol (chấm 2 lần), vết bên phải là sắc tố lá cây
(chấm 3 lần). Chuẩn bị hai tấm bảng giống nhau. 2.1.2
Chuẩn bị bình triển khai
Lau thật sạch và khô bình triển khai (ly thủy tinh). Cắt một tấm giấy lọc đặt vào trong ly.
− Bản 1: giải ly với hệ 5ml eterr dầu hỏa: acetat etyl (8:2)
− Bản 2: giải ly với hệ 5ml eterr dầu hỏa: acetat etyl (5:5)
Cho 5ml hệ dung dịch vào bình. Đậy bình lại bằng tấm kiếng thủy tinh và để yên cho hệ dung
dịch thấm ướt hết giấy lọc.
Cho bản mỏng vào bình triển khai, đậy nắp lại. Khi hệ dung môi thấm ướt đến mứt đánh dấu ở
trên thì lấy bản mỏng ra.
2.1.3. Hiện hình bản mỏng
Khi hệ dung ly thấm ướt đến mức đánh dấu ở trên thì lấy bản mỏng ra. Để yên cho bản mỏng
khô tự nhiên. Sau khi để khô ta quan sát trên bản mỏng: − Bản 1:
+ Dung dịch Vanalin có màu hồng
+ Dung dịch β-napton không màu
+ Dung dịch chiết sắc tố lá cây có một vệt màu gồm nhiều màu (chủ yếu là vàng và xanh) − Bản 2:
+ Dung dịch Vanalin không có màu
+ Dung dịch β-napton không có màu
+ Dung dịch chiết sắc tố lá cây có một vệt màu gồm nhiều màu (chủ yếu là vàng và
xanh) Cho Hiện hình bản mỏng và tính giá trị Rf
− Bản 1: bằng cách phun dung dịch FeCl3 rồi sấy
khô, các vết dần hiện rõ ra.
+ Dung dịch Vanalin có màu hồng đậm.
+ Dung dịch β-napton có màu trắng.
+ Dung dịch chiết sắc tố có vệt gồm nhiều màu (chủ yếu xanh và vàng)
− Bản 2: Phun dung dịch H2SO4 đậm đặc, hơ bản trên bếp nóng.
+ Dung dịch Vanillin có màu đen.
+ Dung dịch β-napton có màu trắng. +
Dung dịch chiết sắc tố gồm nhiều màu (chủ yếu xanh và vàng). 2.2. Trả lời câu hỏi 2.2.1.
Tại sao phải đặt tờ giấy lọc vào bình sắc ký
Để kiểm tra độ bão hòa của hơi dung môi trong bình sắc ký. 2.2.2.
Tại sao phải vạch lằn “mức tiền tuyến dung môi”? Để tiết kiệm
(nhằm chấm được nhiều vết) có thể chấm các vết sát lề bản mỏng được không? Tại sao?
Vạch lằn “mức tiền tuyến dung môi” để làm chổ ta lấy bản sao cho không
ảnh hưởng đến lớp silicagel trên bản, nếu không có mức tiền tuyến ta sẽ chạm vào
đường đi của bản mỏng và vô tình cung cấp tạp chất ảnh hưởng đến hướng di chuyển của các chất.
Không thể chấm các vết sát lề bản mỏng được vì nếu chấm sát lề bản
mỏng thì lúc này diện tích tiếp xúc chính của chất là mặt bên bản mỏng. Nó rất nhỏ
nên lực hút các chất vì vậy cũng nhỏ theo làm cho các chất bên mặt bên cao hơn
chất ở trên mặt trước làm cho giá trị Rf không chính xác. 2.2.3.
Hai hệ dung môi trên, hệ nào tốt hơn? Giải thích
Hệ dung môi dùng với bản 1 hiện vết bằng cách phun dung dịch FeCl3, còn
hệ dung môi dùng với bản 2 hiện vết bằng cách phun dung dịch H2SO4 đậm đặc và
hơ bản trên bếp nóng. Nên hệ dung môi dùng với bản 1 tốt hơn.