BÁO CÁO THỰC HÀNH KIỂM NGHIỆM VI SINH VẬT môn Vi sinh| Trường Đại Học Tây Nguyên

lOMoAR cPSD| 58490434
BÁO CÁO THỰC HÀNH KIỂM NGHIỆM VI SINH VẬT
Bài 1: ĐỊNH LƯỢNG VI SINH VẬT HIẾU KHÍ TỔNG SỐ 1. Mục đích
- Đánh giá mức độ vệ sinh an toàn thực phẩm của một số loài thực phẩm chế biến sẵn.
- Phân tích và đánh giá dựa trên một số chỉ tiêu vi sinh; Tổng vi sinh
vật hiếu khí; Coliforms; Escherichia coli; Tổng nấm men, nấm mốc.
Đối tượng nghiên cứu: Chả giò chín 2. Dụng cụ và hóa chất Dụng cụ : - Đĩa petri vô trùng - Cân điện tử - Ống nghiệm - Pipet, pipetman - Que cấy trải - Giấy bạc - Đèn cồn
Hóa chất : Sử dụng môi trường thạch Tryptone Glucose –PCA và PGA. Tiệt trùng môi trường Môi trường PCA Môi trường PGA Tryptone : 5g Khoai tây : 200g Cao nấm men : 2,5g Glucose : 20g Glucose : 1g Agar : 20g Agar : 18g Nước cất : 1 lít Nước cất : 1 lít
Định lượng tổng số vi sinh vật hiếu khí lOMoAR cPSD| 58490434
Để xác định số lượng vi sinh vật trong một đơn vị khối lượng thực phẩm
bằng phương pháp đếm số khuẩn lạc phải qua quá trình đồng nhất, pha
loãng thành các nồng độ xác định. Chuyển một thể xác định các độ pha
loãng đã đồng nhất vào trong môi trường nuôi cấy. Các khuẩn lạc hình
thành trong môi trường sau khi ủ được xem như chúng hình thành từ một
tế bào riêng lẻ đem ủ ở 300C trong 72h +-6h hoặc 370C trong 48h +-6h.
Chuẩn bị môi trường và tiệt trùng vô khuẩn •
Môi trường nuôi cấy: Plate count Agar (PCA). •
Môi trường nuôi cấy PGA (lấy dịch chiết khoai tây) •
Môi trường pha loãng: LB lỏng Đối với mẫu :
Bơm chính xác 9ml dung dịch pha loãng vào ống nghiệm tiến hành pha
loãng mẫu cân 1g mẫu cho vào ống nghiệm 9ml dung dịch đã pha loãng
ta được độ pha loãng 10-1, hút 1ml 10-1cho vào ống nghiệm chứa 9ml dung
dịch pha loãng rồi lắc đều ta có 10-2, tương tự ta hút 1ml 10-2cho vào ống
nghiệm chứa 9ml dung dịch pha loãng đã chuẩn bị sẵn ta có mẫu 10-3, theo
cách này ta làm cho đến khi nồng độ pha loãng như mong muốn.
- Đồng nhất mẫu : Do sự phân bố không đều của vi sinh vật bên trong
mẫu nên mẫu cần được làm đồng nhất trước khi phân tích Phương pháp đổ đĩa :
Chọn tất cả các đĩa petri có tổng số khuẩn lạc dao động trong
khoảng 25 – 250. Tổng số vi sinh vật hiếu khí được đếm bằng cách đổ đĩa
và ủ trong điều kiện hiếu khí 300 C /72h +-6h hoặc 370C/ 48h +-6h.
Chỉ số này được xác định bằng phương pháp đếm khuẩn lạc mọc trên
môi trường thạch dinh dưỡng từ một lượng mẫu xác định trên cơ sở xem
một khuẩn lạc là sinh khối phát triển từ một tế bào hiện diện trong mẫu và lOMoAR cPSD| 58490434
được biểu diễn dưới dạng số đơn vị hình thành khuẩn lạc (colony foming
unit, CFU) trong một đơn vị khối lượng thực phẩm. 3. Cách tiến hành
Cân mẫu và môi trường đồng nhất được độ pha loãng 10-1
Pha loãng mẫu trong môi trường LB lỏng để được độ pha loãng 10-,102, ,10- 3, 10-4, 10-5
Từ độ pha loãng 10-4 và 10-5 hút 100µl cho vào đĩa petri đã vô
trùng đổ khoảng 15ml môi trường PCA đã hấp khử trùng và làm nguội đến 450C.
Độ pha loãng 10-4 làm 2 đĩa, 10-5 làm 3 đĩa
Lật ngược đĩa ủ trong 300C trong 72h hoặc 370C trong 48h
Chọn các đĩa có số khuẩn lạc trong khoảng 25-250 để đếm
Tính kết quả tổng vi sinh vật hiếu khí có trong mẫu 4.Kết quả
BÀI 2: ĐỊNH LƯỢNG COLIFORM
1. Vật liệu, hóa chất, dụng cụ
- Thiết bị dụng cụ: ống nghiệm, ống Duhan, pipetman 1000 và đầu típ tương ứng, boxcấy. lOMoAR cPSD| 58490434
- Hóa chất: nước muối sinh lý 0.9% và hóa chất nấu môi trường - Nước cất : 1 lít Môi trường LSB Môi trường BGBL – Tryptose: 20g – Peptone: 10g – Lactose: 5g – Lactose :10g – NaCl: 5g – Mật heo: 20g – KH – 2SO4: 2,75g Britiamt green: 0,0133g – Laurgl sunphate: 0.1g – Nước cất : 1lít – H2O : 1lít
Phương pháp chuẩn bị môi trường:
Hòa tan peptone và Lactose vào 500ml nước cất , mật bò ào khoảng
200ml và brilliant green trong khoảng 100ml nước cất. trộn đều 3dd đạt
thể tích cuối là 1L, chỉnh pH môi trường khoảng 7,4. Rót ào mỗi ống
nghiệm có chứa ống durham 10ml môi trường BGBL. Hấp ở 100oC trong
15 phút. Sau đo chuẩn ph 7,2 ± 0,2 ở 25oC
* Điều cần chú ý: môi trường sau khi hấp khử trùng thì để nguội và sử dụng ngay Cách tiến hành
Đồng nhất mẫu pha loãng 10-1,10-2,10-3
Chuyển 1ml dung dịch đồng nhất (10-1,10-2,10-3) sang 10ml MT LSB
Ghi nhận ống dương tính (+) Chuyển 1ml
Môi trường BGBL (48h, 37OC)
Ghi nhận ống dương tính (+) lOMoAR cPSD| 58490434 Kết quả
Hình ảnh khi mới chuyển 1ml từ môi trường LSB sang BGBL