KỸ THUẬT DUNG HỢP TẾ BÀO TRẦN - Khái Niệm và Phương Pháp

KỸ THUẬT DUNG HỢP TẾ BÀO TRẦN 1. Khái niệm:
- Dung hợp là hiện tượng cắt đứt màng sinh chất, nơi mà 2 tế bào trần khác loài tiếp xúc
với nhau do sự tác động của các nhân tố bên ngoài. Sau đó là sự tái tổ chức các màng ban
đầu thành 1 và bao lấy tế bào chất và 2 nhân của cha mẹ.
- Khi 2 hoặc nhiều tế bào trần dung hợp ngẫu nhiên sẽ tạo một khối tế bào trần.
2. Cơ sở tế bào học của dung hợp:
- Màng sinh chất cho phép có thể hấp thu các tế bào đại phân tử ( acid nucleic, protein,
…), thậm chí các cơ quan tử như : lạp thể, ty thể , nhân… theo cơ chế của amip.
- Dung hợp 2 tế bào trần mục đích tạo thành 2 thể lai hỗn hợp và xảy ra các hiện tượng như sau:
+ Dung hợp tế bào chất và cơ quan tử nhưng không dung hợp nhân. + Dung hợp tất cả.
+ Nếu dung hợp chỉ xảy ra tế bào chất và cơ quan tử các nhân vẫn giữ nguyên thì tạo
thành thể lai tế bào chất (Cybrid). Còn trường hợp tế bào chất và nhân được dung hợp thì
tạo tế bào lai thực sự (Hybrid).
- Dung hợp tế bào trần gồm 3 pha:
+ Pha 1: màng sinh chất của tế bào trần tiến sát nhau
+ Pha 2: dung hợp màng tại những vùng nhỏ liên kết chặt dẫn đến hình thành tế bào chất
liên tục hoặc cầu nguyên sinh chất giữa các tế bào trần.
+ Pha 3: các cầu nguyên sinh chất giãn nở và hình thành thể đồng nhân hoặc dị nhân hình cầu
3. Các phương pháp dung hợp
3.1. Dung hợp tự phát:
- Là hiện tượng các tế bào trần ở cạnh nhau dung hợp với nhau
- Đặc điểm: trong quá trình phân cắt thành tế bào bằng enzyme, các tế bào trần được hình
thành từ những tế bào tiếp giáp với nhau có thể dung hợp với nhau qua cầu nối sinh chất.
Việc loại bỏ thành tế bào đã làm cho các cầu nối sinh chất giữu các tế bào giãn nỡ to lên.
3.2. Dung hợp cảm ứng - Phương pháp hoá học:
+ Nguyên tắc: Vì màng sinh chất của tế bào(-) do nhóm P và Protein dẫn tới hiện tượng
các tế bào trần đẩy nhau nên không tự dung hợp. Do đó phải bổ sung vào môi trường yếu
tố cầu nối là hóa chất làm các tế bào trần tiếp xúc và dính với nhau, tăng hiệu quả dung hợp.
+ Hóa chất thuờng sử dụng: NaNO3, polyethylen glycol (PEG), nồng độ Ca2+ cao và pH cao.
- Phương pháp sốc điện:
+ Nguyên tắc: Các protoplast tích điện nên dịch chuyển trong điện trường và tạo chuỗi
giữa hai thanh điện cực, dùng xung điện để làm thủng màng của hai protoplast sát cạnh
nhau khiến chúng hòa trộn vào nhau.
+ Thiết bị: máy tạo xung điện, kính hiển vi đảo pha, buồng dung hợp.
+ Tạo điện trường: đặt trong buồng dung hợp các điện cực platin có khoảng cách 0,2-
1mm và nối với nguồn điện có hiệu điện thế 200V/cm.
+ Tạo xung: hiệu điện thế 500-1000V/cm, thời gian cực ngắn 1-200 mili giây.
+ Hiệu quả dung hợp cao nhưng đầu tư thiết bị lớn.
Document Outline

• KỸ THUẬT DUNG HỢP TẾ BÀO TRẦN
• 2.Cơ sở tế bào học của dung hợp:
• 3.Các phương pháp dung hợp
• 3.2.Dung hợp cảm ứng